Иммунофенотипирование - это исследование, при котором осуществляют опознавание и подсчет лейкоцитов крови, в частности лимфоцитов различных групп, в зависимости от антигенов на их поверхности. Лимфоциты — клетки крови, относящиеся к пулу лейкоцитов и характеризующие иммунную функцию организма человека.
Лимфоциты подразделяются на несколько основных групп — Т-лимфоциты, В-клетки и NK-клетки. Т-лимфоциты отвечают за клеточный иммунитет и, в свою очередь, делятся на Т-хелперов, которые начинают иммунный процесс и активируют другие иммунные клетки, и Т-киллеров (цитотоксические клетки), которые «убивают» пораженные клетки организма. Кроме того, существуют Т-супрессоры, которые позволяют регулировать силу ответа хелперов и киллеров. В-лимфоциты — клетки иммунной системы, которые участвуют в выработке антител (иммуноглобулинов различных классов) и обеспечивают гуморальный иммунный ответ. NK-клетки (естественные киллеры) являются еще одним классом лимфоцитов. По своим свойствам они напоминают Т-киллеры и также являются цитотоксическими лимфоцитами, уничтожающими инфицированные клетки. Однако они отвечают за врожденный иммунитет в большей степени и способны распознавать клетки без главного комплекса гистосовместимости на их поверхности. Для иммунной системы человека характерно наличие так называемых клеток памяти. Это популяция, которая в какой-то момент времени уже сталкивалась с патологическими агентами и способна на более быстрый и качественный иммунный ответ.
Все лимфоциты образуются в красном костном мозге из клеток-предшественников и отличаются друг от друга в зависимости от специальных дифференциальных CD-антигенов на их поверхности. Для каждой популяции характерен свой набор этих антигенов. Окончательная дифференцировка клеток иммунной системы и «получение» ими антигенов на свою поверхность, происходит в органах лимфатической системы. Так, Т-клетки созревают в вилочковой железе (тимусе), а В-лимфоциты в лимфатических узлах и других периферических лимфоидных тканях. При этом для всех лейкоцитов характерно наличие CD45+ поверхностного маркера. У всех Т-лимфоцитов присутствует поверхностный CD3+ антиген. Однако у Т-хелперов на поверхности также есть CD4+ рецептор, в то время как для киллеров характерно наличие CD8+ маркера. У В-клеток отсутствует CD3 маркер на поверхности и присутствует CD19+. NK-лимфоциты имеют CD56+ и CD16+ антигены. Именно за счет различий поверхностных маркеров и возможно фенотипическое исследование.
Как проводят иммунофенотипирование клеток периферической крови?
Для того чтобы распознать различные клетки иммунной системы, используют специальные меченые моноклональные антитела. Исследование производится путем проточной цитофлуометрии. Реакция основана на взаимодействии известных антител, способных к флюоресценции, с уникальными антигенами на поверхности клеток. Происходит склеивание и образование комплекса антиген-антитело, который подсвечивается, проходя через электромагнитное излучение с малым разбросом частот (наиболее часто используется лазерный луч). При этом производят подсчет клеток различных популяций лейкоцитов.
Какие популяции клеток исследуют?
В первую очередь иммунофенотипическое исследование позволяет оценить крупные популяции лимфоцитов. К ним относятся:
- все лимфоциты — абсолютное значение (имеют CD45+ антиген);
- совокупность всех Т-лимфоцитов, которая определяется по наличию (+) CD3+ и отсутствию (-) CD19- на поверхности клетки;
- Т-хелперы (всех типов) с антигенами CD3+ и CD4+;
- цитотоксические Т-киллеры, несущие на себе маркеры CD3+ и CD8+;
- В-лимфоциты, с характерными поверхностными маркерами CD19+ и отсутствием CD3-;
- естественные (натуральные) NK- киллеры с антигенами CD16+, CD56+;
- активные лимфоциты, которые определяются по наличию HLA-DR+ - гликопротеинового маркера активации.
Кроме того, с помощью данного метода можно определить количество моноцитов в крови, которые несут на своей поверхности специфический CD14+ антиген. Также производят оценку соотношения клеток CD4+ (Т-хелперов) к CD8+ (Т-киллерам).
Кому необходимо данное исследование?
Анализ иммунофенотипирование клеток крови назначают:
- Пациентам с частыми простудными заболеваниями;
- При частых рецидивирующих инфекциях мочеполовой системы, поражениях желудочно-кишечного тракта, пневмониях, обострениях вирусных заболеваний и других часто проявляющихся патологических процессах, а также при затяжных процессах с осложнениями в виде сепсиса, менингоэнцефалитов и других серьезных проявлениях;
- При подозрении на врожденный или приобретенный иммунодефицит, в том числе при ВИЧ-инфекции;
- Пациентам с аутоиммунными заболеваниями — рассеянным склерозом, аутоиммунным тиреоидитом, болезнью Аддисона и др.;
- При онкологических заболеваниях, в особенности лимфатической системы и органов кроветворения;
- Людям с аллергическими реакциями — с нейродермитом, атопическим дерматитом, аллергической бронхиальной астмой и другими заболеваниями;
- У пациентов готовящихся и/или перенесших трансплантацию органа;
- При контроле реакции на терапию иммуномодулирующими препаратам (цитостатики, иммуносупрессоры);
- При лихорадке неясного генеза в течение длительного времени.
Что используют для анализа и какие требования к сдаче биологического материала?
Для исследования иммунных клеток используют цельную венозную кровь из кубитальной (локтевой) вены.
Правила сдачи биоматериала:
- Не употреблять пищу за 8-12 часов до исследования, избегать употребления жирного и жареного; в случае необходимости детям и некоторым взрослым разрешен прием легкой пищи за два часа до анализа;
- Не употреблять спиртные напитки минимум 24 часа перед сдачей крови;
- Не курить 30 минут - 2 часа до анализа;
- Избегать физических и эмоциональных стрессов;
- По возможности исключить прием лекарственных препаратов за несколько дней до сдачи крови по согласованию с врачом;
Как интерпретировать полученные результаты?
Лимфоциты крови составляют от 20 до 38% всех лейкоцитов. Их нормальное содержание в крови взрослого человека около 2,5-4,8 *109/л, у детей это значение выше. При этом у людей старше 15 лет Т-лимфоциты не должны превышать 2,2 *109/л. Т-хелперы составляют большую часть (от 35 до 55%) лимфоцитов, а Т-киллеры порядка 17-35%. В-лимфоциты содержаться практически в том же количестве, что и NK-клетки и составляют порядка 0,1-0,4 *109/л для взрослого человека.
Каждая субпопуляция лимфоцитов должна находится в определенном объеме относительно других. Нарушение количественных показателей может характеризовать какой-либо патологический процесс.
Общее повышение уровня Т-клеток может наблюдаться при инфекционно-воспалительных заболеваниях, в первую очередь вирусных, при лейкозах, при приеме некоторых лекарственных препаратов, а также физиологически при беременности у женщин. Снижение же может характеризовать иммунодефицитные состояния, в том числе за счет приема химических веществ, подавляющих работу иммунной системы (иммуносупрессивная терапия). Лимфоциты CD4+ могут повышаться при воспалительных процессах, при этом повышение за счет Т-хелперов 1 типа будет наблюдаться при вирусных или бактериальных инфекциях, в то время как увеличение уровня хелперов 2 типа характерно для аллергических воспалительных реакций. Резкое снижение уровня клеток CD4+ является маркером вторичного иммунодефицита. При аутоиммунных заболеваниях наблюдается увеличение количества Т-хелперов и снижение цитотоксических CD8+ клеток. Рост же уровня Т-киллеров CD8+ наблюдается при активных внутриклеточных процессах вирусной этиологии, реже паразитарных и бактериальных инфекциях, а также при злокачественных новообразованиях. Активированные Т-лимфоциты характеризуют остроту процесса.
Кроме того, для оценки состояния иммунной системы используют соотношение CD4+ хелперов к цитотоксическим CD8+ Т-клеткам. Нормальным считается показатель в пределах от 1,1 до 2,4. Снижение до 0,6 и ниже характерно для ВИЧ-инфицированных пациентов. Такое изменение происходит за счет резкого снижения уровня Т-хелперов, вследствие поражения клеток вирусом иммунодефицита. Повышения индекса соотношения характерно для аутоиммунных патологий, таких как ревматоидный артрит, сахарный диабет 1 типа и др., за счет роста количества клеток CD4+.
Концентрация В-лимфоцитов, вырабатывающих иммуноглобулины разных классов, растет при поражении собственных клеток организма в результате аутоиммунных процессов, при лимфомах, при активных хронических и острых воспалительных процессах различной этиологии. Падение уровня относительно нормальных значений может наблюдаться при перераспределении клеток из периферической крови в очаги воспалительных процессов и при общем снижении активности иммунной системы.
Натуральные киллеры, как и остальные клетки иммунной системы, реагируют на инфецкионно-воспалительные процессы повышением своего количества. При онкологических патологиях также может наблюдаться их рост.
При любом изменении показателей, обнаруженном при иммунофенотипировании клеток периферической крови, необходима консультация с врачом-специалистом для оценки состояния пациента, правильной интерпретации результатов для постановки диагноза и назначения лечения.
Где можно сдать анализ и какова его стоимость?
Анализ на иммунофенотипирование крови можно сдать в лаборатории ДЦЛИ. Записаться на исследование можно ежедневно по номеру телефона. О ценах на иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови уточняйте по номеру телефона, либо на сайте лаборатории.