Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) занимает достойное место в перечне медицинских обследований. Кроме применения в клинической практике, метод широко используется в научных целях и в дальнейшем послужил для развития и других технологий, например, секвенирования.
Исследование методом ПЦР было разработано в 1983 году, когда были сформированы основополагающие принципы исследования, а уже в 1985 году появилась публикация с описанием гена b-глобина, выполненного с применением ПЦР. В 1993 году за открытие полимеразной реакции была присвоена Нобелевская премия по химии. В процессе развития технологии использовались различные способы регистрации полученных данных. Так появились комбинации метода с электрофорезом в геле, с гибридизационно-ферментным анализом (ГиФА), флуоресцентной регистрацией (FLASH). Все перечисленные виды фиксации результатов исследования относятся к ПЦР «по конечной точке». Актуальным, распространённым и наиболее эффективным методом учёта данных является ПЦР в режиме «реального времени» (PCR, real-time). Первым этапом исследования является выделение ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) или РНК (рибонуклеиновая кислота) из исследуемого образца. На ДНК-исследования могут направляться образцы крови, мочи, различных тканей; эпителиальные соскобы (например, ЛОР-органов, половых органов); слюна, мокрота и другие биологические жидкости. Современное оборудование лаборатории позволяет автоматизировать этот процесс. Таким образом, ускоряется время выполнения исследования. Следующим этапом является процесс амплификации, в ходе которого происходит многократное копирование генетической информации, зашифрованной в ДНК или РНК. Для этого подготовленные пробы с реакционной смесью помещают в амплификатор (термоциклер). Процесс копирования происходит благодаря наличию в реакционной смеси фермента ДНК-полимеразы, которая дублирует генетическую информацию до того момента, пока станет возможным произвести регистрацию полученных данных.
Учёт информации происходит с помощью специально разработанных программ. С помощью них можно оценить качество прохождения ПЦР-реакции и при необходимости провести повторное исследование, а также выдать результат в качественном или количественном формате.
Высокая чувствительность технологии позволяет работать с образцами, содержащими даже малые количества возбудителей инфекций, оставаясь при этом также высоко специфичным методом. То есть, ПЦР-исследования позволяют выявить ДНК или РНК конкретного возбудителя из множества близко родственных, одновременно находящихся в образце. Примером может служить выявления вируса папилломы человека 16 типа (ВПЧ 16) при одновременном нахождении в пробе ВПЧ 11 типа. Это является значимым, так как ВПЧ 16 относится к группе высоко онкогенных типов вируса папилломы человека и способен вызывать изменение структуры клетки, что может вести к возникновению онкологического процесса. Особенно важно проводить диагностику инфицирования вирусом папилломы человека женщинам репродуктивного возраста, так как инфицирование не имеет специфичных признаков проявления и может длительно протекать бессимптомно. Поэтому для оценки женского здоровья рекомендуется консультация врача гинеколога, исследования на носительство ВПЧ-инфекции, а также цитологическое исследование.
Рекомендуемые исследования:
- 50-072, ДНК Вируса папилломы человека 16 типа (HPV16)
- 50-076, ДНК Вируса папилломы человека 18 типа (HPV18)
- 50-439, ДНК Вируса папилломы человека высокого онкогенного риска (генотип 16,31,18,39,45,59,33,35,68,56,58,52,66,51), качественный тест
- 50-339, ДНК Вируса папилломы человека высокого онкогенного риска (генотип 16,31,18,39,45,59,33,35,68,56,58,52,66,51)
РНК исследование проводится для вирусных заболеваний (например, для диагностики вируса гепатита С). Гепатит С—это инфекционное заболевание, часто протекающее без симптомов. Способ передачи вируса гемоконтактный, то есть через кровь. Также возможна передача вируса через другие биологические жидкости (сперма, слюна и др.). Инкубационный период длится до 6-8 недель. Характерно формирование хронической формы течения болезни со склонностью к образованию цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы. Исследования методом ПЦР у пациентов, инфицированных вирусом гепатита С, применяются для ранней диагностики, выбора тактики и контроля лечения.
Рекомендуемые исследования:
- 50-227, РНК вируса гепатита С (HCV)
- 50-228, РНК вируса гепатита С (HCV), количественный тест
- 50-229, РНК вируса гепатита С (HCV), генотипирование
ДНК-исследования проводятся для выявления бактериальной, грибковой и вирусных инфекций. Именно поэтому полимеразная цепная реакция (ПЦР) является инструментом диагностики и лечения для врачей разных специальностей (терапевт, инфекционист, генетик, гематолог, иммунолог, гинеколог, гастроэнтеролог, онколог, кардиолог, педиатр, невролог, окулист).
Метод полимеразной цепной реакции применяется в клинической лабораторной диагностике:
- для своевременного выявления инфекционного процесса как в острой, так и в хронической формах, а также в начальном периоде, когда признаков заболевания ещё нет
- для выявления предрасположенности к болезням и диагностики генетических заболеваний
- для оценки и контроля проводимой терапии (например, в лечении вирусных и онкогематологических заболеваний)
- для диагностики онкологических заболеваний и выбора лечебной тактики
- для установления родства
- для оценки эффективности приёма лекарственных препаратов и оценки риска возникновения и тяжести побочных эффектов